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单细胞文库构建介绍

2020-10-10

PicoPLEX DNA-seq Kit
· 高再现性:拷贝数变异(CNV)及染色体异倍性检测重复性高
       · 完整的文库构建试剂:包含所有文库构建所需试剂
       · 简便的工作流程:从单细胞到测序可用文库仅需三步
       · 快速:3小时内完成Illumina NGS文库构建
       · 低污染、低错误发生率:单管内完成文库构建,无需转移
     

■ 产品说明:
PicoPLEX 技术过去常结合基因芯片技术用于检测单细胞层面基因拷贝数变异,现在可以在单管中构建Illumina NGS分析的文库。PicoPLEX? WGA在全球被IVF行业供应商信赖并用于胚胎植入前遗传学筛查和诊断(PGS/PGD)。
       PicoPLEX DNA-Seq Kit简化了文库制备的过程;整个制备过程可在单管或单孔中完成,降低了错误和样品污染的概率,加速了实验进程,并且削减了实验成本。PicoPLEX? DNA-Seq Kit具有48次反应规格,具备完整的48个单独细胞或DNA(6 pg至60 pg)起始的NGS文库构建试剂,包括dual Barcodes。单微孔板中含有Barcoding Oligonucleotides。
     

图1. PicoPLEX  技术概要
     

图2. PicoPLEX DNA-seq测序工作流程。用于Illumina NGS平台测序文库构建的主要步骤,其中PCR板可用单管代替。
     

图3. 染色体异倍性分析的重复性。经流式细胞仪分选出11个不同步的H929细胞,使用本试剂盒制备文库后,经MiSeq测序,将获得的35个base single-end reads比对到人类基因组,对总计250,000 reads进行分析,各细胞得到的结果相同,显示了很高的重现性。
     

图4. NGS与Array分析的比较验证。使用同一胚胎单细胞库分别进行Array和NGS分析,确认本制品和24  sure array(Illumina)两者的等效性。NGS的结果与Array的结果一致。测序结果显示:2p检测到末端丢失(图示),12q检测到末端增加(数据未展示),经高分辨率的FISH分析确认,是与亲代DNA漏检的易位相关。
       *数据来源于Genetics & IVF Institute.      

     

图5. 无需进行文库定量。采用流式细胞仪分选的不同步的H929细胞,使用本试剂盒进行文库构建后,Miseq平台进行测序。由于本产品高重复性的特点,在文库pooling前无需进行定量。注: 图中空白的条带表示该位置处细胞缺失。

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