Takara cDNA文库构建试剂盒 cDNA Library Construction Kit
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Takara
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Takara cDNA文库构建试剂盒 cDNA Library Construction Kit
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华雅思创生物作为Takara授权代理商,为科研人员提供高质量的Takara cDNA文库构建试剂盒 cDNA Library Construction Kit。我们不仅提供产品,还提供技术支持,帮助您实现科研目标。
Takara cDNA Library Construction Kit 是专为合成生物学研究设计的高效文库构建试剂盒。试剂盒包含了从RNA到双链cDNA合成的所有试剂,包括PrimeScript™反转录酶、随机引物、dNTPs和优化的反应缓冲液。通过利用SMART™技术,该试剂盒能高效合成高质量的cDNA,适用于后续的文库构建和高通量测序。
选择Takara cDNA文库构建试剂盒 cDNA Library Construction Kit,为您的合成生物学研究提供可靠的支持。买试剂,找华雅,华雅思创生物是您的信赖之选。
利用真核生物的各种组织或细胞中的Poly(A)+RNA合成cDNA,然后进行基因克隆,这在分子生物学实验中被广泛应用。这一技术的使用,使基因的结构解析及目的蛋白的表达等变得更为方便。
一般合成cDNA以及构建cDNA Library的方法为: ① 合成与目的Poly(A)+RNA相互补的双链cDNA;② 将双链cDNA与细菌或病毒来源的载体进行重组; ③ 将重组体导入细菌或真核细胞内进行扩增,构建cDNA Library。构建成的cDNA Library可以用于cDNA的解析,或者进一步进行体外转录或体外翻译等。
本试剂盒原理采用了Gubler-Hoffman法 (Linker Primer法),是一种可以控制克隆基因方向性的Directional Cloning法,其原理见下图,具体说明如下:
1. 利用反转录酶PrimeScript RTase和Oligo(dT)18 Anchor Primer1,3-5)合成1st Strand cDNA。1st Strand cDNA合成时使用5-methyl dCTP。
2. E.coli RNase H使mRNA-1st Strand cDNA杂合体中的RNA形成Nick,再使用E.coli DNA Ploymerase和E.coli DNA Ligase将RNA链置换成DNA链,合成2nd Strand cDNA。
3. 使用T4 DNA Polymerase将双链cDNA末端平滑化。
4. 与Adaptor连接后,使用Not I 进行酶切。
5. 使用Spin Column除去短链cDNA。
6. 与Vector pAP3neo进行连接 (Directional Cloning)。
7. 利用电刺激转化法导入大肠杆菌。
8. 确认克隆效率及插入片段大小等。