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背景
自噬是一种溶酶体降解细胞质物质的途径，在应激条件下如氨基酸饥饿或病毒感染时被激活。哺乳动物细胞在短时间的饥饿状态下通过自噬来降解非必需的细胞成分，从而释放出营养物质用于生物合成反应。最近的研究结果表明，自噬也有助于发育、生长调节和癌症，以及长寿。在氨基酸饥饿等应激信号的诱导下，自噬的*步是自噬体的形成。一种发表良好的自噬体标记蛋白。MAP LC3最初被鉴定为微管相关蛋白，命名为微管相关-蛋白轻链-3’。LC3是一种小的16- 18kda蛋白，可溶于非饥饿细胞，但在氨基酸饥饿时成为外周膜相关蛋白。通过免疫电子显微镜，LC3已被证明与自噬体的内外膜结合，而膜结合是通过与脂质磷脂酰乙醇胺的共价结合介导的。在Western blot中，LC3有两种形式，LC31和LC311。LC31在可溶性部分，ano LC3Il在颗粒状膜部分。非饥饿细胞中均可见LC3I和LC3II，但自噬诱导过程中LC3Il的比例增加。gfp标记的LC3表达可能有助于自噬实验。pcv -GFP-LC3是一种简单的哺乳动物表达载体，其中人LC-3B基因与GFP基因在表达载体框架内融合(图1)。两种载体均含有卡那霉素和新霉素抗性基因作为选择标记。
图1所示。注意:细菌培养应在含30 ug/mL卡那霉素的培养基中进行。
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