CHANG Amnio羊水培养基使用说明

原代培养：原位法

1. 将羊水低速离心以浓缩细胞。

2. 用少量病人自己的羊水重悬细胞颗粒。例如，将10ml羊水纺丝上清吸至细胞颗粒上方0.5mL，再悬浮。在浓缩的细胞悬液中加入足够的CHANG Amnio®，使最终镀液体积为每个盖片0.5mL(共4个盖片)或每个小瓶2mL。

3.在37°C、5%-8%的CO2大气中不受干扰地培养。

4. 第2天淹水培养，加入2mL CHANG Amnio®。

5. 4 - 5天后，检查培养物的生长情况。一旦观察到生长情况，应饲喂培养物。去除所有培养上清，用2mL新鲜CHANG Amnio®替换培养物。建议以后每2天喂一次培养液。

6. 在第5天或之后检查培养物的生长情况，当观察到足够的菌落时采摘。

7. 结果是在收获前一天用CHANG Amnio进行培养。

原代培养：培养瓶法

1. 将羊水低速离心以浓缩细胞。

2. 用少量病人自己的羊水重悬细胞颗粒。例如，将10mL羊水纺丝上清吸至细胞颗粒上方1mL，再悬浮。加入4mL CHANG Amnio，总体积为每瓶5mL。

3.在37°C、5%-8%的CO2大气中不受干扰地培养。

4. 第5天检查生长情况。用新鲜羊膜更换培养基，如果观察到足够的细胞生长就收割。

5. 检查培养物的生长情况，此后每天更换培养基，直到观察到足够的菌落并准备收获。

6. 结果是在收获前一天用CHANG Amnio进行培养。

传代培养

要传代细胞，用胰蛋白酶(或pronase，等等)处理培养物，就像你通常在传统培养基中培养细胞那样。但是，应该仔细监测蛋白酶的处理。在CHANG羊膜中培养的羊水细胞对蛋白酶的敏感性高于在常规培养基中培养的羊水细胞。可能有必要修改您的协议以考虑到这一点。用于培养的培养基的pH值必须在6.65-7.44之间(即培养基必须是微黄的鲑鱼色)。pH值可以很容易地调整，只需将培养基放在5%-8%的CO2培养箱中，轻轻松开盖子约30分钟。

注:羊膜常形成草酸钙晶体。这些晶体的存在尚未被证明会对产品性能造成任何不利影响。