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蛋白纯化之偶联的配基应用

2021-09-16

       糖类亲和色谱是一种纯化糖蛋白,凝集素和其他糖代谢蛋白的方法这种亲和色谱使用糖类配基比如糖类,糖蛋白类和糖类基质用于纯化。基质

需要被活化用于配基的共价固定。用于偶联配基的各种方法取决于活化的试剂如下:


The divinyl sufone (DVS) 偶联:


       Diviny sulfone (DVS) 是一种双官能的化合物用于激活包含羟基基团的基质. DVS活化的基质能够共价结合糖和碳水化合物通过存在于碳水化合

物上的羟基。使用DVS来进行基质的活化是快速的,通常室温70 min. 这种方法不仅引入一个高度反应性的乙烯基同时也有一个间隔臂来避免结合

键的位阻. 这种二乙烯砜活化的基质是稳定的悬浮液在4°C 下可以保存一年。 DVS偶联配基的连接化学性能在碱性条件下是不稳定的,因此凝集素

的酸性洗脱是推荐使用当PH洗脱方法需要的时候。 


环氧化物偶联:

 

       环氧化物配基偶联的方法使用双官能化合物叫做环氧乙烷环氧乙烷比如 1,4-butanediol diglycidyl ether 被固定到琼脂糖基质上来形成环氧化

物活化的琼脂。这种环氧化物活化的琼脂在水溶液中是不稳定的因此应该立即被用于配基的偶联。环氧化物琼脂和配基形成共价键,这种配基包含

亲核物质比如氨基,巯基 ,羟基和酚功能基团。碳水化合物有自由的羟基能够和环氧化物反应形成醚键。这个偶联的化学反应能够额外提供一个12

原子的亲水的位阻空间。因为这种偶联条件对于碳水化合物来说要求高的PH值和高的温度, 这种方法不推荐用于二氧化硅和玻璃微珠基质。 

N-羟基琥珀酰亚胺偶联:

N-羟基琥珀酰亚胺方法中, N-羟基琥珀酰亚胺作为偶联剂使用这个偶联剂能够和包含胺基的配基形成稳定的化学键. 这种稳定的胺化学键在配基

和偶联剂之间形成.这种方法用于偶联包含针对基质的胺基基团的糖蛋白或碳水化合物衍生物. 这种偶联方法并且提供一个8个碳的空间位阻。


溴化氰偶联:

这种偶联方法用于固定包含氨基基团的配基。这种方法不适用于偶联小分子因为它不能提供任何空间位阻。这种偶联方法适用于固定糖蛋白.

丙基硫氧嘧啶偶联:

 

      丙基硫氧嘧啶活化的基质包含活化的 2-thiopyridyl disulphide基团能够和包含巯基的配基发生可逆反应来形成混合的二硫化物. 它用于固定糖蛋

白通过存在于糖蛋白上的自由巯基基团. 可以用于固定碘乙酰胺碳水化合物衍生物通过巯基的烷化. 丙基硫氧嘧啶偶联的方法也提供一个空间位阻。


吖内酯偶联:

吖内酯活化的基质是通过丙烯酰胺和吖内酯的共聚作用形成. 这种方法适用于包含氨基基团的配基反应从而适用于糖蛋白的结合.

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