Application

来自猪胰腺的胰蛋白酶已被用于消化鸡骨头。它还被用于分离黄体内皮细胞。。

对于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶:肽的使用比例约为1:100至1:20。本品的典型用途是使贴壁细胞从培养表面脱落。 使细胞解离所需的胰蛋白酶浓度主要取决于细胞类型和培养物代数。 Trypsins也被用于细胞培养过程中的细胞再悬浮，在蛋白质组学研究中用于蛋白质的消化，以及在各种凝胶消化中。 其他的应用包括通过基于膜的技术评估结晶，以及在一项研究中确定蛋白质折叠速率和产量可以被动力学陷阱的存在所限制。

Biochem/physiol Actions

胰蛋白酶可切割赖氨酸和精氨酸残基的C末端肽段。 如果酸性残基位于切割位点的任意一侧，则该反应的水解速度减慢，并且如果脯氨酸残基位于切割位点的羧基侧，则水解停止。 胰蛋白酶活性的 pH条件为7-9。 胰蛋白酶还可以切割氨基酸合成衍生物的酯和酰胺键。 将EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作为螯合剂，用于中和钙离子和镁离子以防止其抑制胰蛋白酶活性。 去除这些离子会增加酶活性。

丝氨酸蛋白酶抑制剂（包括DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF和抑肽酶等）会抑制胰蛋白酶。

Preparation Note

本品为冻干粉，可以25mg/mL溶于Hank′s平衡盐溶液。

对于需要EDTA的应用，溶解胰蛋白酶应该使用不含Ca2+ 或 Mg2+的缓冲盐溶液.

Other Notes

一个BAEE单位以BAEE作为底物，在25°C、pH 7.6条件下每分钟每毫升产生0.001的ΔA253 。一个BTEE单位=320个ATEE单位。反应体积=3.2mL（1cm的光径）。

胰蛋白酶是由含223个氨基酸残基的单链多肽组成的，它通过切割胰蛋白酶原的Lys-1le肽键以去除N-末端六肽而获得。 氨基酸序列通过6个二硫键交联。 这是天然形式的胰蛋白酶——β-胰蛋白酶。 β-胰蛋白酶可以自溶，在Lys-Ser残基处断裂，产生α-胰蛋白酶。 胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶家族的成员。

Disclaimer

溶于1mM HCl的溶液分装后可在-20℃稳定保存1年。Ca2+ 的存在也会降低胰蛋白酶的自水解性，保持其在溶液中的稳定性。 胰蛋白酶也将在2.0 M尿素、2.0 M盐酸胍或0.1% (w/v) SDS中保持大部分活性。