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摘要：本文完整给出红荣微再 Inspire Spark（MJ5463 系列）小 RNA 转染试剂标准操作流程，包含不同孔板试剂 RNA 配比、孵育条件、样本收集时间，同时汇总实验失败常见原因与排查方案，帮助科研人员减少 siRNA 转染实验返工。
本教程适用于 siRNA、miRNA mimic、ASO 等小 RNA；不适用于质粒 DNA 转染。储存条件：试剂 4℃避光保存，禁止冷冻。
| 培养板类型 | 接种细胞数量 | 转染试剂用量 | RNA 用量 | 体系总培养基体积 |
|---|---|---|---|---|
| 96 孔板 | 1?4×10? | 0.5?μL | 0.5?μL | 0.2?mL |
| 24 孔板 | 0.5?2×10? | 2?μL | 2?μL | 0.5?mL |
| 12 孔板 | 2?4×10? | 4?μL | 4?μL | 1?mL |
| 6 孔板 | 0.25?1×10? | 8?μL | 8?μL | 2?mL |
提示：不同细胞对试剂耐受不同，正式实验前建议设置梯度（±25% 试剂用量）寻找最优条件。
注意：不需要提前用无血清培养基稀释。
可能原因： ①细胞汇合度不合适，过密或者过稀； ②RNA 本身降解、siRNA 序列无效； ③试剂冷冻过，脂质已经失效； ④复合物孵育时间不对； 解决：确认试剂 4℃储存没有冻过；验证 RNA 完整性；优化细胞铺板密度；梯度提高转染试剂用量；可尝试二次加复合物加强转染。
可能原因：试剂配比过高；细胞本身状态差、支原体污染；部分原代细胞对脂质敏感。 解决：降低转染试剂用量；确认细胞无支原体污染；设置只加转染试剂的毒性对照组。
可能原因：取样时间过早；siRNA 本身序列无效；转染只进入细胞质但没有发挥 RNAi 功能。 解决：收样时间延后至 48h；更换验证有效的 siRNA 序列。
可能原因：复合物没有混匀；滴加复合物的时候局部浓度过高；细胞铺板不均匀。 解决：复合物充分吹打混匀；滴加后轻柔十字摇晃孔板，不要漩涡摇晃；保证细胞铺板均匀。
Q：复合物孵育超过 10 分钟会不会影响效果？ A：建议严格 10min；不建议超过 20min，放置过久复合物颗粒团聚，转染效率下降。
Q：转染之后培养基变黄需要处理吗？ A：只要细胞没有大量死亡，不用特意换液；营养消耗严重可以正常补加培养基。
Q：阴性对照、空白对照组怎么设置？ A：至少设置三组：空白细胞组；只加转染试剂对照组；阴性 NC?siRNA 对照组，排除试剂毒性、siRNA 非特异性干扰。
Q：做完预实验效果好，正式实验效果差是什么原因？ A：重点排查：细胞支原体污染；试剂储存是否被冷冻；RNA 反复冻融降解；细胞传代次数过高状态变差。
华雅思创现货供应红荣微再 Inspire Spark transfecter RNA 转染试剂 MJ5463?03 / MJ5463?10 / MJ5463?15，可提供操作说明书，可提供转染实验技术答疑。本产品仅限科研用途，不能用于人体临床。
